無菌檢測，無懼超級抗生素！---賽多利斯實(shí)驗室

[2019/4/12]

無菌檢測，無懼超級抗生素！---賽多利斯實(shí)驗室
開展以下試驗是用于證明Sterisart®系統(tǒng)在過濾完硫酸多粘菌素B后，仍可以讓微生物在其中正常生長。
實(shí)驗背景
在沒有抑制劑的情況下，微生物可以快速增殖。在培養(yǎng)基加入系統(tǒng)之前，可能存在于無菌檢測藥品樣品中的任何防腐劑或抗生素殘留物都必須被沖洗去除。由于多粘菌素不能被中和，所有與樣品接觸的部件必須為低吸附，且所采用的設(shè)計形式必須保證能夠?qū)崿F(xiàn)徹底沖洗從而去除所有殘留。
試驗描述
Sterisart® 系統(tǒng)經(jīng)無菌生理鹽水潤濕后，對硫酸多粘菌素B溶液進(jìn)行過濾。在完成沖洗步驟之后，根據(jù)歐洲藥典要求，將硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基加入Sterisart® 系統(tǒng)的一個容器內(nèi)。向這個容器內(nèi)接種50-100CFU微生物，進(jìn)行微生物培養(yǎng)，最多培養(yǎng)3天。

材料和設(shè)備
抗生素硫酸多粘菌素B 批號：A 1411058
檢測菌株
綠膿桿菌
硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基
NaCl
Merck;
泵
Sterisart®通用型無菌檢測泵
Sterisart®通用型無菌檢測泵
Sterisart® 裝置
Sterisart® NF,
Sterisart® NF適配器
檢測準(zhǔn)備
1
無菌生理鹽水
為制備0.9%的無菌生理鹽水溶液，先將9g固體NaCl溶解于1L去離子水中，裝入帶有隔膜的瓶中，制備2L。然后對配制完成的溶液進(jìn)行121°C、40分鐘的高壓蒸汽滅菌
2
抗生素溶液的溶解(20 g/L)
2.1 背景
抗生素的溶解是無菌檢測操作中非常關(guān)鍵的操作步驟。未溶解的殘留抗生素會被膜過濾器截留，導(dǎo)致培養(yǎng)過程中抑制微生物生長。試驗表明使用30°C的生理鹽水溶解硫酸多粘菌素B最為迅速可靠。更為詳細(xì)的試驗描述和試驗結(jié)果請參考Sterisart® 應(yīng)用指南No.1。針對下一步驟，我們還專門開發(fā)了一種注入和搖勻的方法。生理鹽水的預(yù)熱可通過培養(yǎng)箱或水浴輕松實(shí)現(xiàn)。
2.2 樣品制備
取事先準(zhǔn)備好一個帶有隔膜的500ml瓶(瓶A)，內(nèi)含10g抗生素混合物。將Sterisart® NF適配器16470的無標(biāo)識管路插入泵中，然后將16470帶有黃色標(biāo)記的長針頭插入瓶B的隔膜中，該瓶內(nèi)裝有500ml已預(yù)熱至30°C的無菌生理鹽水；進(jìn)而將短針頭插入裝有抗生素的瓶A的隔膜中。瓶A以一定角度倒置，使
抗生素凍干粉落到瓶頸處。然后將NaCl溶液以設(shè)定值為300的泵速打入裝有抗生素的瓶A中。

大約5秒鐘后，將瓶A恢復(fù)正位，讓抗生素和NaCl溶液一起回落到瓶底。流體的泵入壓力要足以將粘在玻璃瓶壁上的抗生素沖洗下來。向瓶A注入溶液到500ml刻度，然后搖動瓶子直至抗生素完全溶解。以上操作步驟使用了貨號為16470的Sterisart®NF適配器和貨號為16413的Sterisart®通用型無菌檢測泵，該泵是現(xiàn)有16420無菌檢測泵的上一代產(chǎn)品。有關(guān)Sterisart® NF 適配器16470使用的詳細(xì)信息見產(chǎn)品說明書。
試驗方法
膜過濾
將Sterisart® 系統(tǒng)16466裝入泵中后，向系統(tǒng)泵入100ml無菌生理鹽水，用于潤濕濾膜。然后向Sterisart® 系統(tǒng)中泵入無菌空氣以排空溶液。隨后，500ml溶解好的抗生素經(jīng)容器濾過。需特別當(dāng)心，避免抗生素液體沾到后續(xù)無法沖洗到的區(qū)域。再次用無菌空氣排空裝置。隨后用5×200ml無菌生理鹽水沖洗濾膜，以確保無抗生素殘留在膜和塑料部件上，從而不會抑制微生物的生長。有關(guān)Sterisart®NF裝置的詳細(xì)使用信息見所附產(chǎn)品說明書。
注入培養(yǎng)基
將100ml硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基注入Sterisart® 系統(tǒng)兩個容器中的一個。用夾子將管路夾緊封好，在距夾子約10cm處切斷管路。第二個容器用于進(jìn)一步檢測。
接種微生物
硫酸多粘菌素B適用于多數(shù)革蘭氏陰性細(xì)菌。因此試驗使用綠膿桿菌(革蘭氏陰性菌)。通過系列稀釋方式確保每ml綠膿桿菌溶液中含50-100CFU菌。取
1.0ml綠膿桿菌溶液加入硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基中。
培養(yǎng)
Sterisart® 容器在30 °C條件下培養(yǎng)3天。每天檢查微生物的生長情況。
結(jié)果
培養(yǎng)48h后，可明顯觀察到微生物在Sterisart® 容器內(nèi)生長。培養(yǎng)基非常渾濁（生長情況良好）。

結(jié)論
使用5×200ml生理鹽水沖洗即可確保抗生素的有效去除。微生物生長試驗結(jié)果表明測試所用硫酸多粘菌素B在Sterisart®系統(tǒng)內(nèi)沒有殘留，不存在促進(jìn)或抑制微生物生長效應(yīng)。

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