基因組DNA的分離純化提取方法講解

[2019/7/31]

基因組DNA的分離純化提取方法講解

DNA的提取是分子生物學研究的基礎技術,提取的DNA的純度及結構完整性是進行基因工程各項研究所必需的條件。歸納基因組DNA提取的各個環節．

同時對DNA提取過程中的常見問題、原因及應對策略作簡要的分析綜述。

實驗的一般步驟為

1．破碎細胞.

2．DNA的提取

3．DNA的純化

第一步中破碎細胞常用有三種方法

①機械法：主要通過機械切力的作用使組織細胞破碎的方法。

本實驗常用的器械有玻璃勻漿器。將剪碎的組織置于管中，再

套入研桿來回研磨，上下移動，即可將細胞研碎。勻漿器的研

缽磨球和玻璃管內壁之間間隙保持在十分之幾毫米距離。此法

細胞破碎程度較高，適用于量少和動物臟器組織。②化學法：有些化學藥品可以改變細胞膜的通透性從而使內合物

有選擇地滲透出來。例如某些有機溶劑（如苯、甲苯）、抗生

素、表面活性劑、金屬螯合劑、變性劑等。

實驗中常用GA緩沖液，GA緩沖液中含有表面活性劑可以打開

細胞的磷脂雙分子層，增加通透性。且GA緩沖液是低滲溶液，細

胞易吸水漲破，達到更好打開細胞的效果。

特點：作用比較溫和

存在的問題：作用時間長，效率低；化學試劑毒性較強，同

時對產物也有毒害作用，進一步分離時需要用透析等方法除去這

些試劑。

③酶解法：利用各種水解酶，破碎細胞將細胞內含物釋放出來。

常用蛋白酶K和十二烷基硫酸鈉(SDS)消化破碎細胞。

此種方法的特點是：適用范圍廣；作用條件溫和；內含物成分不

易受到破壞。但其成本高，限制了大規模的利用且耗時較長。

以上三種破碎細胞的方法可結合使用，使細胞破碎完全，利于接

下來的步驟。

第二步中DNA的提取有兩種方法：

①沉淀法

實驗常采用異丙醇或無水乙醇快速提取DNA

一般經典酒精標本DNA提取方法都會加入蛋白酶K，且在56℃條件下消化3h以上，以達到組織中蛋白質的完全消化。

得到的提取液經RNA酶處理，酚、氯仿和異戊醇反復抽提，即可得較純的DNA產物。

好了，以上就是小編為大家分享的有關“基因組DNA的分離純化提取方法”的一些信息，希望對各位科研人員有所幫助。

推薦閱讀：

分光光度計有哪些用途及注意的事項有哪些烘箱的常見問題及解決辦法

上一篇：恒溫恒濕試驗箱與恒溫恒濕培養箱的區別

下一篇：低溫培養箱的制冷原理以及操作規范

国产日韩一区二区三区在-国产日韩一区二区三区视频免费-国产日韩一区二区三区视频-国产日韩一区二区三区免费高清-国产日韩一区二区三区高清视频-国产日韩一区二区三区高清

基因組DNA的分離純化提取方法講解

基因組DNA的分離純化提取方法講解