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秘:如何選擇一臺稱心的凝膠成像系統
[2019/7/11]
凝膠成像系統幾乎是每個分子生物學實驗室的必需品。幾十年來,凝膠成像的設備已經從簡單的紫外線和寶麗來相機
發展到先進的數字化數據采集和分析系統。它的用途是從瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠上分離的DNA中獲取信息。
據Bio-Rad的全球產品經理RaymondMiller介紹,目前很難研究市場,并確定誰是凝膠成像系統的客戶,因為這個系統的
應用如此廣泛。“這是一種無處不在的技術。如果你身處生命科學領域,你就需要用到凝膠成像系統。”
在此,我們就介紹一些選購時的重要考慮因素,包括多功能、靈敏度、動態范圍和易用程度。
靈敏度和動態范圍
盡管一些DNA成像應用只需要粗略的測定或“有沒有”的結果,但大多數的研究人員還是希望獲得最佳的數據質量。在選
購凝膠成像系統時,靈敏度和動態范圍往往是兩個重要的考慮因素。
很多人認為,相機分辨率是評估系統靈敏度的最佳參數,但Uvitec公司的經理KarineVictory認為,“事實上,靈敏度是通
過大的鏡頭光圈、出色的低噪聲相機、電子噪聲的進一步深度冷卻以及樣品與光圈的最近距離來實現的。”她提醒說,拼
接(binning)的做法可能犧牲CCD相機的分辨率。它允許在圖像捕獲時收集更多的光,但通過降低像素總數來降低總的分辨率。
靈敏度是UVP(德國耶拿旗下公司)開發凝膠成像系統時優先考慮的事情。GelDoc-ItTS3是一臺獨立的成像系統,適合DNA
和蛋白凝膠。它帶有500萬像素的相機和廣角f/1.2鏡頭,以提供高分辨率和快速圖像捕獲。這個系統還可以升級到-57oC的
CCD冷卻相機,用于化學發光成像。
UVP的產品經理SarahChaudhury認為,最新一代的GelDoc-It系列成像系統的進步包括“更靈敏的相機和光學元件,
以及一鍵式的圖像捕獲和分析自動化”。
動態范圍與靈敏度密切相關。動態范圍寬,則意味著在同一幅圖像中可檢測到低水平和高水平的樣品。對于某些應用而言
,動態范圍是重要的考慮因素,例如監控刺激化合物的影響或抑制劑對表達的影響。
LI-CORBiosciences提供了動態范圍超過6個對數的儀器。據LI-COR的產品營銷經理JeffHarford介紹,這意味著圖像不會飽和。
這家公司的OdysseyFc成像儀是為EB、SYTO60或SYBR等染料染色的DNA凝膠而設計的,并配有一次性托盤,以減少污染。
OdysseyCLx適用于SYTO60染料。
Harford表示,在評估凝膠成像系統時,數據采集的一致性也需要認真考慮。“動態范圍寬的技術有助于各塊凝膠之間獲得一致的數據。
確保技術是面向未來的。出版社很關心數據的可靠性和重復性,因此你需要確保你的系統每天提供穩定的數據。
系統是否能做什么來消除凝膠或印跡之間的差異,這是很重要的。”他說。
多功能
盡管一臺簡單、專用的凝膠成像系統似乎是一個不錯的選擇,但大多數客戶感興趣的是多功能的系統,這指的是所分析的凝膠類型、
檢測方法和應用范圍。為此,許多制造商生產出多功能的儀器,如多重熒光檢測、兼容比色樣品,甚至有更多的應用,
如Western分析或組織切片分析。
GEHealthcare生命科學部就提供一系列激光掃描儀,有著靈活的應用。它的AmershamTyphoon5生物分子成像儀可以對熒光、
放射性標記和比色樣品進行成像、除了適用于DNA凝膠、蛋白凝膠和印跡,這個系統還可以成像和分析微孔板、培養皿、組織切片及其他許多樣品類型。
除了激光掃描儀,GE還提供了兩款CCD相機系統–ImageQuantLAS500和更先進的AmershamImager600,可用于DNA凝膠成像。
GEHealthcare的資深科學家ErikBjerneld認為,研究人員在選擇成像儀時,應當考慮是否需要化學發光檢測。
“如果用戶主要對化學發光感興趣,那么我們建議用CCD成像系統。如果熒光成像的靈敏度和分辨率更加重要,則建議使用激光掃描儀,”他說。
安全性和易用性
目前市場上有一個趨勢,就是凝膠成像的自動化。這意味著,你只要將凝膠放入系統中,按下按鈕就能完成分析。大多數系統提供一定程度的自動化。
例如,UVP的GelDoc-ItTS3配備了廣泛的自動化功能。VisionWorks軟件可以利用預設的拍攝參數,
如自動曝光、對焦、縮放等實現一鍵式的圖像采集。
用戶考慮的另一個因素是安全性,這主要涉及到EB的使用。大家都知道,EB是誘變劑,需要特殊處理。
平時,人們都會使用手套、防護設備,并防止儀器被EB污染。
如今,許多更安全的染料可用于DNA凝膠,而儀器制造商也對成像系統進行了相應的優化,以支持這些更安全的選擇。
易用性也是Bio-Rad產品的一大特點。它的產品包括入門級GelDocEZ系統、功能更全的GelDocXR+系統,
以及適用于工業規模凝膠成像的GS-900校準密度計。“我們投入了大量精力讓這些系統更加易用,”Miller說。
這包括大部分凝膠成像工作的自動化,比如縮放和對焦。
如今,DNA凝膠成像系統的市場十分成熟,也充滿競爭,在每個價格點都有多個選擇。總的來說,
個體需求和具體應用始終是首要的考慮因素,比如儀器在特定染料上的表現及檢測方法的切換能力。
人們也許很難找到儀器在特定應用中的一對一比較數據,因此需要密切留意產品資料,并與銷售代表溝通。
當然,這個系統應當是面向未來的,考慮到現在及將來的需求。