引言  過去幾年來，市場上已出現了多種不同的微生物快速檢測方法。這些方法的共同點是，它們只能在生物負荷相對較高的情況下使用。但是在飲料行業，必須能檢測出每毫升或每瓶中的極少量微生物污染染。對于上述應用，唯一可行的方法就是使用相對較大的樣品體積濃縮少量微生物。最快速的濃縮方法是使用薄膜過濾法過濾 (利用篩選作用將顆粒和微生物截留在濾膜表面)。將濾膜置于特殊的培養基中培養，使截留到的微生物形成能夠計數的可見菌落。如果使用培養基組合 (德語縮寫為“NPS”) 替代自制的瓊脂培養基，則可大大簡化該過程，且更經濟實惠。

NPS

  NPS培養基是經過脫水處理的無菌培養基。它們是由無生物毒性的纖維素墊組成的，不含抑制劑和影響微生物生長的化學物質。墊片上含有了無菌培養基成分，并在無菌條件下“預先鋪在”一次性培養皿中。與易變質且易污染的瓊脂培養板不同，NPS培養基可保存兩年，某些類型甚至可以保持極佳的生長特性達數年。

 如需使用NPS培養基，只需將無菌水預先加入其中。軟化水優于自來水，自來水經常被化學物質污染。推薦使用3–3.5ml水，水必須定量加入，保證并非所有水均被墊片吸收，培養皿中也含有一些水分。在生長過程中，微生物可以吸收這些水分。鑒于該優勢，相比其他瓊脂培養基，可以更早地分析在NPS培養基中培養的菌落。例如，檢測麥芽汁培養基上的酵母時，若使用NPS培養基替代瓊脂板，則可節省半天時間。     

NPS培養基組合可與膜過濾方法結合使用。各種NPS培養基都提供相應的獨立無菌包裝濾膜。如需要，NPS培養基還可用作劃線平板。但是，墊片上必須使用濾膜，否則無法生長出單獨的菌落。

NPS培養基與自制瓊脂培養基相比有何優勢？

NPS培養基可在未配備大量微生物設備的實驗室中使用。無需高壓滅菌器、干燥箱或水浴鍋。用于浸濕NPS培養基的無菌水可抽至注射器中。該注射器與0.2μm的一次性過濾器相連。

避免了耗時的培養基制備，容器和設備清潔滅菌的步驟。

每個批次的NPS培養基均已經過測試，與相應的瓊脂培養基進行比較。這可以確保用戶獲得穩定的實驗結果。

置于實驗室柜中避光干燥保存時，大部分類型的NPS培養基的使用壽命將遠超過包裝上標注的有效期。無需亦不推薦置于冰箱中保存。

在浸濕溶液中加入添加劑，可以進一步改變NPS培養基：在麥芽汁或橙色血清NPS培養基中加入約5%乙醇可以促進醋酸菌的生長。在浸濕溶液中加入葡萄糖，可以將酵母檢測范圍縮小至嗜高滲酵母檢測。 

薄膜過濾法的優勢也為NPS培養基帶來了更多優點： 

飲料中的生長狀態

細菌、酵母和霉菌是會影響軟飲料質量的微生物。一般而言，酵母需要富含碳水化合物的營養物質方可生長。真菌和細菌可以代謝幾乎所有有機化合物。細菌和真菌廣泛存在于各種環境中，而酵母通常僅限于含糖的基質，如水果、液體和固體水果制劑和甜味產品。除礦物質水外，大部分軟飲料包含大量的糖，因此為酵母提供了理想的生長條件。

在微生物種類中，只有特殊的變異體才能夠利用軟飲料提供的條件生長繁殖，這是因為飲料中存在抑制因素：

只有極少量可使飲料變質的微生物能引起外觀、味道和氣味的變化。表1列出了可在不同飲料中引起變質的微生物。

首先是酵母，尤其是具有高發酵活性的釀酒酵母、畢赤酵母、漢遜酵母、球擬酵母和生長緩慢的酒香酵母。乳酸桿菌屬和明串珠菌屬的乳酸菌也可引起飲料變質。

霉菌和醋酸菌 (如葡糖桿菌屬) 是低碳酸作用或非碳酸飲料中常見的腐敗菌

飲料中可以檢測到的常見的微生物有水微生物、具有氧化代謝作用的酵母、桿菌或微球菌的芽胞，即便這些微生物的計數值可能不是很高。表2列出了用于特定測試的NPS培養基的類型。

飲料類型測試

 水

常見的革蘭陰性水微生物有假單胞菌、黃桿菌、葡糖桿菌和產堿桿菌、革蘭陽性微球菌、螺旋菌、弧菌和光合細菌。可污染或影響飲料味道的常見微生物是腸桿菌和腸道球菌。可形成芽胞的細菌亦可存在于富含營養物的水中。與微碳酸和碳酸瓶裝水相比，具有嚴格的無氧條件的碳酸水更不易出現腐敗菌。

根據歐盟飲用水標準，必須利用傾注法測試1ml水，確定需氧嗜溫菌菌落計數。當進行內部在線控制或另外采樣時，上述法規不適用。在這種情況下，您可以使用更大的樣本體積以及更實用的薄膜過濾法。瓶裝水的微生物測試亦采用類似的方法，測試250ml樣本，排除可疑微生物的存在 (大腸桿菌、大腸菌群、糞鏈球菌和綠膿桿菌)。

 軟飲料跟果汁

 水微生物通常不存在于大部分軟飲料中，因為它們已被前面提到的抑制因素抑制。只有耐酸性的微量需氧微生物會增殖，引起飲料變質。它們通常需要在很長時間后方才開始增殖，因為這些微生物需要時間來適應基質的生長條件。因此，能夠可靠且準確地檢測微量感染至關重要。將整瓶飲料通過波膜過濾即可簡單地實現。采用這種方法尤其容易過濾果汁、可樂和蘇打水。但含有果漿的飲料，尤其是粘稠的果肉飲料則很難過濾。根據果漿顆粒大小的不同，某些情況下可通過預過濾提高過濾量。盡管如此，預過濾濾膜也必須進行培養，至少進行酵母檢測，將相對較大的酵母細胞計數在內。使用具有較大孔徑的濾膜作為微生物檢測濾膜時，可以獲得足夠的果漿飲料樣本體積。可利用1.2μm至3μm的孔徑 (有時甚至達到8μm) 檢測酵母菌，使果漿通過濾膜。

濃縮果汁跟糖漿

 這些產品一般已受保護，防止微生物腐敗，但必須注意防止少量腐敗菌的特殊變異體的污染。這主要包括酵母尤其是耐滲透壓酵母以及某些可形成粘液的細菌。由于微生物不影響濃縮物或糖漿本身，而只是在稀釋成最終飲料時，能夠加速生長和提高發酵性能，因此濃縮果汁中的微生物控制更多的是建立微生物計數而非確定產品腐敗。

糖

糖尤其是液體形式的糖也采用類似的方法。除了只能在pH 4.5以上增殖的芽胞菌外，可形成粘液的細菌腸系膜明串珠菌是最易引起糖腐敗的微生物。該細菌又稱為“蛙卵桿菌”，因為它可以生成膠狀、粘液覆蓋的細胞團塊。

蔬菜汁

蔬菜汁的pH值高于4.5，因此任何可形成芽胞的細菌的存在都會引起變質問題。當滅菌不充分時風險更高。任何殘留的芽胞都可以存活很長時間，幾個月后最終會轉變為活細胞。在厭氧芽胞菌中，細菌生長的同時伴隨著氣體形成和容器膨脹；需氧芽胞菌還可引起“平酸菌”變質，尤其是在高溫保存的產品中。

一般衛生監控

一般的衛生條件監控對于飲料生產過程中的在線控制是必不可少的，包括測試空瓶、瓶清潔機器、灌裝機器以及所有的清潔和去污溶液和沖洗水。

沖洗法是最適合瓶監控的技術：在瓶中灌裝50 ml無菌沖洗溶液，如生理鹽水或0.1%蛋白胨水，密封，充分振蕩，洗下內壁上的微生物。然后倒出瓶中的內容物，使其通過濾膜過濾，充分沖洗，在標準或標準TTC NPS培養基上培養，蓋子也可使用蛋白胨水或生理鹽水振蕩。

清潔消毒劑和沖洗水也通過膜過濾。應確保濾膜徹底沖洗，因為微量殘留的消毒劑會延遲或抑制微生物生長。

過濾器和壓蓋機是二次污染的重要部位。可采用無菌棉拭子采樣，然后沖洗。隨后使用薄膜過濾法測試該液體。

對瓶裝產品、全部原材料、每個生產步驟和主要衛生點的細致測試是飲料生產中必不可少的環節，可以使飲料達到長期保存和運輸所需的微生物穩定性，且不引起外觀、味道或氣味的變化。