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紙上DNA診斷,準確度媲美PCR

[2015/12/2]

DNA分析對于許多疾病的診斷和監控十分重要,最常見最可信的DNA測試方法是聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction,PCR),它特異性強、靈敏度高、操作簡便省時,但也還是需要在實驗室中使用專門設備進行。如果有更方便、廉價的方法可以進行DNA分析,那么降低患者負擔、提高某些疾病的早期篩查比例這些目標就更加容易實現。

最近,加拿大多倫多大學的David Sinton等人利用紙質設備,通過一個外加電場,使用離子濃差極化法(ion concentration polarization,ICP)完成對DNA的直接分析。該研究發表于《J. Am. Chem. Soc.》。

離子濃差極化法由Sinton在去年發明(Anal. Chem., 2014, DOI:10.1021/ac502597v),可以控制帶電分子在濕紙上的運動。現在,他的研究小組將這一方法用于操縱DNA的流動方向。

首先,他們在紙上打印蠟從而劃分出一個儲液池以及一條長而細的通道。在儲液池的邊緣,他們在小區域內的紙上涂覆帶正電荷的Nafion聚合物。然后,將染料標記的DNA注入到儲液池中。通過對紙施加電場,使帶負電的DNA聚集到涂有Nafion的區域。然后切換電場的極性,DNA順著通道向下遷移,并根據分子量和電荷的不同而分離開。再對照標準DNA的結果,就可以知道待測DNA的種類。這有些類似DNA樣品的凝膠電泳,但Sinton說,這個方法更簡單也更便宜,試紙僅需花費幾美分。

Sinton等人隨后進行了臨床樣本的測試。僅需十分鐘,就能完成人類血清樣本中乙肝病毒(HBV)DNA的預濃縮、分離、檢測。而且,這一技術對HBV DNA的檢測限僅為150 copies/mL,因而無需預先擴增病毒,足以用于乙型肝炎的早期診斷。該團隊還利用該方法分析人類精液樣品中的片段化DNA的比例,以評估精子的活力。這一方法得到結果與經典的精子染色質結構分析法(SCSA)結果一致。在所有病例中,這種紙基方法的結論與最后基于PCR的臨床診斷結論都相同,臨床診斷準確率達到100%。

目前,該團隊正計劃設計一種便攜式設備,為這種紙基技術提供合適的電壓,并直接觀察結果。


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