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微生物實驗常用的36種培養(yǎng)基的配制說明

[2017/4/20]

1.牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(用于細菌培養(yǎng))

牛肉膏3g,蛋白胨10gNaCl 5g,水1000mLpH7.47.6

2.高氏1號培養(yǎng)基(用于放線菌培養(yǎng))

可溶性淀粉20gKNO1gNaCl 0.5gK2HPO4•3H2O 0.5gMgSO4•7H2O0.5gFeSO4•7H2O0.01g,水1000mLpH7.47.6。配制時注意:可溶性淀粉要先用冷水調(diào)勻后再加入到以上培養(yǎng)基中。

3.馬丁氏(Martin)培養(yǎng)基(用于從土壤中分離真菌)

K2HPO41gMgSO4•7H2O0.5g,蛋白胨5g,葡萄糖10g1/3000孟加拉紅水溶液100mL,水900mL,自然pH121℃濕熱滅菌30min。待培養(yǎng)基融化后冷卻5560℃時加入鏈霉素(鏈霉素含量為30μg/mL)

4.馬鈴薯培養(yǎng)基(PDA)(用于霉菌或酵母菌培養(yǎng))

馬鈴薯(去皮)200g,蔗糖(或葡萄糖)20g,水1000mL,配制方法如下:

將馬鈴署去皮,切成約2cm2的小塊,放入1500mL的燒杯中煮沸30min,注意用玻棒攪拌以防糊底,然后用雙層紗布過濾,取其濾液加糖,再補足至1000mL,自然pH,霉菌用蔗糖,酵母菌用葡萄糖。

5.察氏培養(yǎng)基(蔗糖硝酸鈉培養(yǎng)基)(用于霉菌培養(yǎng))

蔗糖30gNaNO3 2gK2HPO4 1gMgSO4•7H2O0.5gKCl 0.5gFeSO4•7H2O0.1g,水1000mLpH7.07.2

6.Hayflik培養(yǎng)基(用于支原體培養(yǎng))

牛心消化液(或浸出液)1000mL,蛋白胨10gNaCl 5g,瓊脂15gpH7.88.0,分裝每瓶70mL121℃濕熱滅菌15min,待冷卻至80℃左右,每70mL中加入馬血清20mL25%鮮酵母浸出液10mL15醋酸鉈水溶液2.5mL,青霉素G鉀鹽水溶液(20萬單位以上)0.5mL,以上混合后傾注平板。

*注意:醋酸鉈是極毒的藥品,需特別注意安全操作。

7.麥?zhǔn)?/span>(McCLary)培養(yǎng)基(醋酸鈉培養(yǎng)基)

葡萄糖0.1g, KCl 0.18g,酵母膏0.25g,醋酸鈉0.82g,瓊脂l.5g,蒸餾水l00mL。溶解后分裝試管,1l5℃濕熱滅菌15min

8.葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基(用于V.P.反應(yīng)和甲基紅試驗)

蛋白胨0.5g,葡萄糖0.5gK2HPO4 0.2g,水100mLpH7.21l5℃濕熱滅菌20min

9.蛋白胨水培養(yǎng)基(用于吲哚試驗)

蛋白胨10gNaCl 5g,水1000mLpH7.27.4121℃濕熱滅菌20min

10.糖發(fā)酵培養(yǎng)基(用于細菌糖發(fā)酵試驗)

蛋白胨0.2gNaCl 0.5gK2HPO0.02g,水100mL,溴麝香草酚藍(1%水溶液)0.3mL,糖類lg。分別稱取蛋白胨和NaCl溶于熱水中,調(diào)pH7.4,再加入溴麝香草酚藍(先用少量95%乙醇溶解后,再加水配成1%水溶液),加入糖類,分裝試管,裝量45cm高,并倒放入一杜氏小管(管口向下,管內(nèi)充滿培養(yǎng)液)115℃濕熱滅菌20min。滅菌時注意適當(dāng)延長煮沸時間,盡量把冷空氣排盡以使杜氏小管內(nèi)不殘存氣泡。常用的糖類,如葡萄糖、蔗糖、甘露糖、麥芽糖、乳糖、半乳糖等(后兩種糖的用量常加大為1.5%)

11.RCM培養(yǎng)基(強化梭菌培養(yǎng)基)(用于厭氧菌培養(yǎng))

酵母膏3g,牛肉膏l0g,蛋白胨10g,可溶性淀粉lg,葡萄糖5g, 半胱氨酸鹽酸鹽0.5gNaCl 3gNaAc 3g,水l000mLpH8.5,刃天青3mg/Ll2l℃濕熱滅菌30min

12.TYA培養(yǎng)基(用于厭氧菌培養(yǎng))

葡萄糖40g,牛肉膏2g,酵母膏2g,胰蛋白胨(bacto-typetone)6g,醋酸銨3gKH2PO4 0.5gMgSO4•7H2O0.2gFeSO4•7H2O0.01g,水1000mL pH6.5121℃濕熱滅菌30min

13.玉米醪培養(yǎng)基(用于厭氧菌培養(yǎng))

玉米粉65g,自來水1000mL,混勻,煮10min成糊狀,自然pH121℃濕熱滅菌30min

14.中性紅培養(yǎng)基(用于厭氧菌培養(yǎng))

葡萄糖40g,胰蛋白胨6g,酵母膏2g,牛肉膏2g,醋酸銨3gKH2PO4 5g,中性紅0.2gMgSO4•7H2O0.2gFeSO4•7H2O0.01g, 1000mLpH6.2121℃濕熱滅菌30min

15.CaCO3明膠麥芽汁培養(yǎng)基(用于厭氧菌培養(yǎng))

麥芽汁(6波美)1000mL,水1000mLCaCO310g,明膠10gpH6.8,121℃濕熱滅菌30min

16.BCG牛乳培養(yǎng)基(用于乳酸發(fā)酵)

(A)溶液:

脫脂乳粉100g,水500mL,加入1.6%溴甲酚綠(B.C.G)乙醇溶液1mL80℃滅菌20min

(B)溶液:

酵母膏10g,水500mL,瓊脂20g, pH6.8,121℃濕熱滅菌20min。以無菌操作趁熱將(A)(B)溶液混合均勻后倒平板。

17.乳酸菌培養(yǎng)基(用于乳酸發(fā)酵)

牛肉膏5g,酵母膏5g,蛋白胨10g,葡萄糖10g,乳糖5gNaCl 5g,水1000mLpH6.8121℃濕熱滅菌20min

18.酒精發(fā)酵培養(yǎng)基(用于酒精發(fā)酵)

蔗糖10g,MgSO4•7H2O0.5g,NH4NO30.5g,20%豆芽汁2mLKH2PO4 0.5g,水100mL,自然pH

19.柯索夫培養(yǎng)基(用于鉤端螺旋體培養(yǎng))

優(yōu)質(zhì)蛋白胨0.4g, NaCl0.7g,KCl 0.02g, NaHCO3 0.01gCaCl 0.02gKH2PO40.09gNaH2PO40.48g,蒸餾水500mL,無菌兔血清40mL

制法:

除兔血清外的其余各成分混合,加熱溶解,調(diào)pH7.2121℃濕熱滅菌20min,待冷卻后,加入無菌兔血清,制成8%血清溶液,然后分裝試管(510mL/管),56℃水浴滅活lh后備用。

20.豆芽汁培養(yǎng)基

黃豆芽500g,加水1000mL,煮沸lh,過濾后補足水分,121℃濕熱滅菌后存放備用,此即為50%的豆芽汁;
用于細菌培養(yǎng):

10%豆芽汁200mL,葡萄糖(或蔗糖)50g,水800mLpH7.27.4
用于霉菌或酵母菌培養(yǎng):

10%豆芽汁200mL,糖50g,水800mL,自然pH。霉菌用蔗糖,酵母菌用葡萄糖。

21.LB(Luria—Bertani)培養(yǎng)基(細菌培養(yǎng),常在分子生物學(xué)中應(yīng)用)

雙蒸餾水950mL,胰蛋白胨l0gNaCl l0g,酵母提取物(bacto- yeast extract)5g,用lmol/L NaOH (l mL) 調(diào)節(jié)pH值至7.0,加雙蒸餾水至總體積為1L121℃濕熱滅菌30min

含氨芐青霉素LB培養(yǎng)基:

LB培養(yǎng)基滅菌后冷至50℃左右加入抗生素,至終濃度為80100mg/L
22.復(fù)紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基(遠藤氏培養(yǎng)基)(用于水體中大腸菌群測定)蛋白胨10g,牛肉浸膏5g,酵母浸膏5g,瓊脂20g,乳糖10gK2HPO40.5g,無水亞硫酸鈉5g5%堿性復(fù)紅乙醇溶液20mL,蒸餾水1000mL

制作過程:

先將蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏和瓊脂加入到900mL水中,加熱溶解,再加入K2PO4,溶解后補充水至l000mL,調(diào)pH7.27.4。隨后加入乳糖,混勻溶解后,于115℃濕熱滅菌20min。再稱取亞硫酸鈉至一無菌空試管中,用少許無菌水使其溶解,在水浴中煮沸10min后,立即滴加于20mL5%堿性復(fù)紅乙醇溶液中,直至深紅色轉(zhuǎn)變?yōu)榈奂t色為止。將此混合液全部加入到上述已滅菌的并仍保持融化狀態(tài)的培養(yǎng)基中,混勻后立即倒平板,待凝固后存放冰箱備用,若顏色由淡紅變?yōu)樯罴t,則不能再用。

23.乳糖蛋白胨半固體培養(yǎng)基(用于水體中大腸菌群測定)

蛋白胨10g,牛肉浸膏5g,酵母膏5g,乳糖10g,瓊脂5g,蒸餾水1000mLpH7.27.4,分裝試管(l0mL/)115℃濕熱滅菌20min

24.乳糖蛋白胨培養(yǎng)液(用于多管發(fā)酵法檢測水體中大腸菌群)

蛋白胨10g,牛肉膏3g,乳糖5gNaCl 5g,蒸餾水l000mL1.6%溴甲酚紫乙醇溶液lmL。調(diào)pH7.2,分裝試管(l0mL/),并放入倒置杜氏小管,l15℃濕熱滅菌20min

25.三倍濃乳糖蛋白胨培養(yǎng)液(用于水體中大腸菌群測定)

將乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中各營養(yǎng)成分以擴大3倍加入到l000mL水中,制法同上,分裝于放有倒置杜氏小管的試管中,每管5mL1l5℃濕熱滅菌20min

26.伊紅美藍培養(yǎng)基(EMB培養(yǎng)基)(用于水體中大腸菌群測定和細菌轉(zhuǎn)導(dǎo))

蛋白胨l0g,乳糖10gK2HPO4 2g,瓊脂25g2%/伊紅Y(曙紅)水溶液20mL,0.5%美藍(亞甲藍)水溶液l3mLpH7.4

制作過程:

先將蛋白胨、乳糖、K2HPO4和瓊脂混勻,加熱溶解后,調(diào)pH7.41l5℃濕熱滅菌20min,然后加入已分別滅菌的伊紅液和美藍液,充分混勻,防止產(chǎn)生氣泡。待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右倒平皿。如培養(yǎng)基太熱會產(chǎn)生過多的凝集水,可在平板凝固后倒置存于冰箱備用。在細菌轉(zhuǎn)導(dǎo)實驗中用半乳糖代替乳糖,其余成分不變。

27.加倍肉湯培養(yǎng)基(用于細菌轉(zhuǎn)導(dǎo))

牛肉膏6g,蛋白胨20gNaCl 10g,水1000mLpH7.47.6
28.半固體素瓊脂(用于細菌轉(zhuǎn)導(dǎo))瓊脂1g,水100mL121℃濕熱滅菌30min

29.豆餅斜面培養(yǎng)基(用于產(chǎn)蛋白酶霉菌菌株篩選)

豆餅100g加水56倍,煮出濾汁100mL,汁內(nèi)加入KH2PO4 0.1%MgSO4 0.05%,(NH4)2SO4  0.05%,可溶性淀粉2%pH6,瓊脂2%2.5%  

30.酪素培養(yǎng)基(用于蛋白酶菌株篩選)

分別配制A液和B液。
A液:

稱取Na2HPO4•7H2O1.07g。干酪素4g,加適量蒸餾水,并加熱溶解。
B液:

稱取 KH2PO4 0.36g,加水溶解。AB液混合后,加入酪素水解液0.3 mL,加瓊脂20g,最后用蒸餾水定容至1000mL

酪素水解液的配制:

1g酪蛋白溶于堿性緩沖液中,加入1%的枯草芽孢桿菌蛋白酶25mL加水至100mL30℃水解l h。用于配制培養(yǎng)基時,其用量為1000mL,培養(yǎng)基中加入100mL以上水解液。

31.細菌基本培養(yǎng)基(用于篩選營養(yǎng)缺陷型)   

Na2HPO4•7H2O1gMgSO4•7H2O0.2g,葡萄糖5gNaCl 5gK2HPO4lg,水l000mLpH7.01l5℃濕熱滅菌30min

32.YEPD培養(yǎng)基(用于酵母原生質(zhì)體融合)

酵母粉10g,蛋白胨20g,葡萄糖20g,蒸餾水1000mLpH6.0115℃濕熱滅菌20min

33.YEPD高滲培養(yǎng)基(用于酵母原生質(zhì)體融合)

YEPD培養(yǎng)基中加入0.6mol/LNaCL3%瓊脂。

34.YNB基本培養(yǎng)基(用于酵母原生質(zhì)體融合)

0.67%酵母氮堿基(YNB, 不含氨基酸,Difco),2%葡萄糖,3%瓊脂,pH6.2

另一配方為:

葡萄糖10g(NH4)2SO4 1gK2HPO40.125gKHPO0.875gKI 0.0001gMgSO4•7H2O0.5gCaCl2•2H2O0.lgNaCl0.1g,維量元素母液lmL,維生素母液lmL(母液均按常規(guī)配制),水1000mLpH5.86.0

35.YNB高滲基本培養(yǎng)基(用于原生質(zhì)體融合)

YNB基本培養(yǎng)基中加入0.6mol/LNaCl

36.酚紅半固體柱狀培養(yǎng)基(用于檢查氧與菌生長的關(guān)系)

蛋白胨1g,葡萄糖10g, 玉米漿10g,瓊脂7g,水1000mLpH7.2。在調(diào)好pH后,加入1.6%酚紅溶液數(shù)滴,至培養(yǎng)基變?yōu)樯罴t色,分裝于大試管中,裝量約為試管高度的1/21l5℃滅菌20min。細菌在此培養(yǎng)基中利用葡萄糖生長產(chǎn)酸,使酚紅從紅色變成黃色,在不同部位生長的細菌,可使培養(yǎng)基的相應(yīng)部位顏色改變,但注意培養(yǎng)時間太長,酸可擴散以致不能正確判斷結(jié)果。
以上各種培養(yǎng)基均可配制成固體或半固體狀態(tài),只需改變瓊脂用量即可,前者為1.5%2.0%,后者為0.3%0.8%


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