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細胞培養的注意事項
[2017/3/13]
養好細胞注意點
(一)冷凍管應如何解凍
取出冷凍管后,須立即放入37 ℃ 水槽中快速解凍,輕搖冷凍管使其在1分鐘內全部融化,并注意水面不可超過冷凍管蓋沿,否則易發生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時,必須注意安全,預防冷凍管的爆裂。
(二)細胞冷凍管解凍培養時,DMSO如何處理
在細胞解凍之后,可直接離心去除DMSO,用新鮮的培養基懸浮后直接放入含有 新鮮培養基的培養角瓶中進行細胞培養,如此可避免解凍后細胞生長受到DMSO影響。
(三)可否使用與原先培養條件不同的培養基
每一細胞株均有其特定使用且已適應的細胞培養基,若驟然使用和原先提供培養條件不同的培養基,細胞大都無法立即適應,造成細胞無法存活,不應該馬上替換。
(四)可否使用與原先培養條件不同的血清種類
血清是細胞培養上一個極為重要的營養來源,所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。
(五)何謂 FBS,FCS,CS,HS
FBS (fetal bovine serum) 和 FCS (fetal calf serum) 是相同的意思,兩者都是指胎牛血清。CS (calf serum) 則是指小牛血清。HS (horseserum) 則是指馬血清。
(六)培養細胞時應使用 5% 或 10% CO2
一般培養基中大都使用 HCO3-/CO32-/H+ 作為 pH 的緩沖系統,而培養基中 NaHCO3 的含量將決定細胞培養時應使用的 CO2 濃度。理論當培養基中 NaHCO3 含量為每公升 3.7 g 時,細胞培養時應使用 10% CO2;當培養基中 NaHCO3 為每公升 1.5 g 時,則應使用 5% CO2 培養細胞。