各國的技術標準對生物柴油產品中的總甘油含量（鍵合甘油含量+游離甘油含量）和游離甘油含量都作出了限制。其中“鍵合甘油”并不是甘油，而是指生物柴油中甘油三酯、甘油二酯和甘油單酯的總量。

　　甘油和甘油酯是生物柴油生產過程中產生的主要副產物，在生物柴油燃燒的過程中，它們會沉積在發動機中，這對發動機的正常運轉是有害的。業界一致認為，甘油和甘油酯的含量是決定生物柴油品質的一個主要因素。同時，通過測定游離甘油和總甘油的含量也能看出原料的反應程度，這對生物柴油制備過程的監控意義重大。

　　因為各技術標準中規定的甘油類物質的含量上限較低，所以人們需要精確而可靠的方法來進行分析測定。通常選用毛細管氣相色譜法來實現。有學者聲稱只有GC能夠滿足測定生物柴油中低含量甘油酯的所有要求。但是在進行測定之前，必須先將標樣的純度用液相色譜儀進行檢測，否則如果標樣物質不純，會導致氣相色譜儀的分析結果不準確。

　　最初人們采用基于酶催化結合分光光度計的方法來分析生物柴油中的甘油類物質。但這種方法比較復雜，可重復性也比較差。

　　1992年，Bondioli等提出了一種GC-FID聯用的方法，以測定生物柴油中的游離甘油。后來人們又研發了一種將GC-MS聯用來對生物柴油中的甘油酯進行定量分析的方法。該法使用一根(5%苯基)-甲基聚硅氧烷柱與質譜儀聯用，能夠得到非常準確的定量分析數據。但是在進行分析之前要用N,O-雙（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺（BSTFA）對樣品進行硅烷化。  

　　Mittelbach等提出用GC-MS法也可以測定生物柴油中的游離甘油含量，而且精度高，速度快，還可同時測定生物柴油中的甲醇。

　　1995年Plank等研究出了另一種GC-FID法，可以同時測定生物柴油樣品中的甘油和各種甘油酯。后來，這種方法先后被歐盟的EN14105標準、美國的ASTM6584標準和我國的GB/T20828標準所采用。但是這個方法仍然有其缺陷。

　　2007年Chong等提出了一種測定甘油酯類的新方法，他們先用含氟酸的酸酐將酯類氟化，然后將GC-MS技術和FT-IR聯用，測定生物柴油中的甘油酯。這種方法可以減少分析時間和成本。

　　將HPLC和GC聯用，充分發揮HPLC的分離優勢，也可以測定生物柴油中的游離甘油量和總甘油量。這兩項技術聯用可以使GC的色譜圖變得比較簡單，這樣可以在圖上標出更多更可靠的峰。