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RT-PCR、Western blot和ELISA三者的區別

[2015/11/9]

  PCR是從轉錄水平上檢測目的基因而非蛋白從轉錄到翻譯還有復雜的過程因此基因的表達量與蛋白的表達量不一定是正相關的
  WB只能半定量但是可以檢測細胞膜蛋白這點ELISA做不到
  ELISA可用定量方法檢測蛋白也就是說你可以觀察不同濃度刺激物對目的蛋白的影響
  基因翻譯蛋白質PCR可以檢測基因的表達量,絕對定量和相對定量。但基因翻譯表達蛋白質是個復雜的過程,有可能出現基因量大而蛋白質少,或者相反,甚至其他情況。所以,PCR是從基因層面DNAmRNA進行的檢測,而Western Blot是目前一種結合內參對蛋白質進行半定量的方法,Elisa可以定量檢測某些蛋白、激素等

  一、目的
  雖然兩者都是通過抗原抗體反應對蛋白質進行檢測,WB主要還是定性,Elisa可以定性,也可以定量。
  WB所檢測的一般是抗原,而Elisa抗原抗體都可以檢測。
  WB所檢測的抗原可以知道其分子量的大小,或是否是多聚體、降解產物等,一句話,WB可以確定所用抗體是與那種蛋白起作用的;而Elisa無能為力,一鍋端了。

  二、模式
  WB是(抗原-抗體-二抗酶)模式進行檢測;Elisa模式有多種,如(抗原-抗體-二抗酶)、(抗原-抗體-抗原酶)、(抗抗體-抗體-抗原酶)、(抗體-抗原-抗體酶)、(抗抗體-抗體-抗原-抗體酶)等等很多很多。

  三、抗體的適用性
  WB所適用的一抗一般是線性位點的,ELISA線性或構象型抗體都可以使用。從另一個意義上講,WB可以做抗體是線性位點還是構象型位點的補充判定,而Elisa不行。

  四、靈敏度
  一般Elisa的靈敏度要遠高于WB,這從一般酶標記物的使用濃度或待檢樣品的稀釋度上就可以看出。

  五、可操作性
  WB一次處理量就是一塊膠版,10-20個樣品最多了。Elisa一塊96孔板一次可以處理96個樣本,可以設置多個復孔、對照、梯度樣等來提高檢測的可信度。
  WB操作常見的非特異性條帶,膜本底差,顯色不好等等缺點在Elisa上表現得要好得多。

  六、商品化度
  WB不管怎樣,都要自己先做電泳。而Elisa有很多成熟的商品化試劑盒了,只要不怕花錢,檢測要方便快捷得多。 


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