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簡單操作這五個步驟巧去牛血清脂肪酸
[2015/3/12]
一、溶解:取適量的牛血潔白蛋白提取物,溶解于10倍的蒸餾水中,溶解溫度在23~27℃。用濃度為0.2N的HCl,調治PH至3~3.5。
二、分析:充實溶解后的溶液牛血潔白蛋白移至冰水殽雜物中舉行冰水浴,同時連續攪拌,維持30min。
① PH為3~3.5 ② 活性炭用量為5~6%
三、吸附:參加5%的活性炭,混勻,混懸液將混懸液移至冰水殽雜物中舉行冰水浴,同時連續攪拌,維持1小時。過濾,濾渣采取后再利用。冰水殽雜物的溫度為0~4℃
四、濃縮:濾液用0.2N的NaOH調治PH值至7.0,然后用20000分子量以下的超濾器舉行超濾濃縮。
五、凍干:將濃縮液按凍干曲線凍干,即將超濾后的濃縮液敏捷冷凍至-40℃,連續1小時左右,升到-25℃,連續10~20小時,再遲鈍升溫至0℃,維持1~4小時,升溫至生存溫度20℃,分裝為成品。
牛血清在細胞培養實驗中的分析
1.細胞生長速度遲鈍,長滿單層時間長;從同一細胞瓶中分出兩瓶細胞,用同一種作育液,分別參加10%的比較血清和待檢血清,在雷同條件下作育72小時,會出現比較血清長滿單層,而待檢血清約莫只有60~70%,這種血清就不得當用來大范圍作育細胞。
2.細胞傳代后形態不正常,細胞狀態產生變革;由于血清的質量問題,使本來狀態正常的細胞經傳代后形態會變差;好比:細胞瓶里會出現一些蠕動的小黑點(并非污染),大概細胞外貌形成一層油狀包圍物;細胞的表面變得暗昧,細胞之間的間隙被血清中的蛋白顆粒添補,從而影響細胞向四周擴展生長。
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