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細胞培養失敗的主要原因
[2015/3/9]
細胞培養,也叫細胞克隆技術,在生物學中的正規名詞為細胞培養技術。不論對于整個生物工程技術,還是其中之一的生物克隆技術來說,細胞培養都是一個必不可少的過程,細胞培養本身就是細胞的大規模克隆。細胞培養,既包括微生物細胞的培養,細胞培養技術可以由一個細胞經過大量培養成為簡單的單細胞或極少分化的多細胞,這是克隆技術必不可少的環節,而且細胞培養本身就是細胞的克隆。通過細胞培養得到大量的細胞或其代謝產物。因為生物產品都是從細胞得來,所以可以說細胞培養技術是生物技術中最核心、最基礎的技術。消毒和滅菌微生物污染是造成細胞培養失敗的主要原因:
物理消毒法
1.紫外線消毒:紫外線是一種低能量的電磁輻射,可殺死多種微生物。革蘭陰性菌最為敏感,其次是陽性菌,再次為芽孢,真菌孢子的抵抗力最強。紫外線的直接作用是通過破壞微生物的核酸及蛋白質等而使其滅活,間接作用是通過紫外線照射產生的臭氧殺死微生物。直接照射培養室消毒,用法簡單,效果好。
紫外燈的消毒效果同紫外燈的輻射強度和照射劑量呈正相關,輻射強度隨燈距離增加而降低,照射劑量和照射時間呈正比。因此紫外燈同被照射物的距離和照射時間要適合。離地面2米的30W燈可照射9平方米房間,每天照射2-3小時,期間可間隔30分鐘。燈管離地面2米以外要延長照射時間,2.5米照射效果較差。紫外燈照射工作臺的距離不應超過1.5米,照射時間30分鐘為宜。
紫外燈不僅對皮膚、眼睛傷害,且對培養細胞與試劑等也產生不良影響,因此,不要開著紫外等操作。
3.高溫濕熱滅菌:壓力蒸汽滅菌是最常用的高溫濕熱滅菌方法。對生物材料有良好的穿透力,能造成蛋白質變性凝固而使微生物死亡。布類、物、璃器皿、屬器皿、膠和某些培養液都可以用這方法滅菌。
不同壓力蒸汽所達到的溫度不同,不同消毒物品所需的有效消毒壓力和時間不同。從壓力蒸汽消毒器中取出消毒好的物品(不包括液體),應立即放到60-70℃烤箱內烘干,再貯存備用,否則,潮濕的包裝物品表面容易為微生物污染。煮沸消毒也是常用的濕熱消毒方法,它具有條件簡單、使用方便等特點。
4.高溫干熱消毒:干熱滅菌主要是將電熱烤箱內物品加熱到160℃以上,并保持90-120分鐘,殺死細菌和芽孢,達到滅菌目的。主要用于滅菌玻璃器皿(如體積較大的燒杯、培養瓶)、金屬器皿以及不能與蒸汽接觸的物品(如粉劑、油劑)。
干熱滅菌后要關掉開關并使物品逐漸冷卻后在打開,切忌立即打開,以免溫度驟變而使箱內的玻璃器皿破裂。干烤箱內物品間要有空隙,物品不要靠近加熱裝置。
燒灼也是滅菌方法之一,常利用臺面上的酒精燈的火焰對金屬器皿及玻璃器皿口緣進行燒灼消毒。
5.過濾除菌:是將液體或氣體用微孔薄膜過濾,使大于孔徑的細菌等微生物顆粒阻留,從而達到除菌目的。在體外培養時,過濾除菌大多用于遇熱容易變性而失效的試劑或培養液。