高效液相色譜儀在進(jìn)行多成分的復(fù)雜樣品分離時(shí)，經(jīng)常會(huì)碰到前面的一些成分分離不完全，后面的一些成分分離度太大，且出峰很晚和峰形較差。為了使保留值相差很大的多種成分在合理的時(shí)間內(nèi)全部洗脫并相互分離，往往要用到梯度洗脫技術(shù)。

        在高效液相色譜儀中流速（壓力）梯度洗脫和溫度梯度洗脫效果不大，而且會(huì)帶來(lái)一些不利影響，因此，高效液相色譜儀中的梯度洗脫通常是指流動(dòng)相梯度洗脫，即在分離過(guò)程中改變流動(dòng)相的組成或濃度。高效液相色譜儀的梯度洗脫技術(shù)有線(xiàn)性梯度洗脫、階梯梯度洗脫、高壓梯度洗脫和低壓梯度洗脫等。

一、線(xiàn)性梯度洗脫：

        在某一段時(shí)間內(nèi)連續(xù)而均勻增加流動(dòng)相強(qiáng)度。

二、階梯梯度洗脫：

        直接從某一低強(qiáng)度的流動(dòng)相改變?yōu)榱硪惠^高強(qiáng)度的流動(dòng)相。

三、高壓梯度洗脫：

        采用兩臺(tái)高壓輸液泵，分別按設(shè)定的比例輸送A和B兩種溶液至混合器，混合器在泵之后，兩種溶液在高壓狀態(tài)下混合。

        優(yōu)點(diǎn)：通過(guò)梯度程序控制器控制每臺(tái)泵的輸出，就能獲得任意形式的梯度曲線(xiàn)，而且精度很高，易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化控制。

        缺點(diǎn)：使用了兩臺(tái)高壓輸液泵，儀器價(jià)格昂貴，故障率相對(duì)較高，而且只能實(shí)現(xiàn)二元梯度洗脫。

四、低壓梯度洗脫：

        只需一臺(tái)高壓輸液泵，與等度洗脫相比，在泵前安裝了一個(gè)比例閥，混合在比例閥中完成。比例閥在泵之前，溶液在常壓（低壓）下混合。在常壓下混合容易形成氣泡，通常需要配置在線(xiàn)脫氣裝置。

        四元梯度洗脫過(guò)程：來(lái)自于四種溶液瓶的四根輸液管分別與在線(xiàn)真空脫氣裝置的四條流路相接，經(jīng)脫氣后的四種溶液進(jìn)入比例閥，混合后從一根輸出管進(jìn)入高壓輸液泵。