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氨基酸分離純化的辦法

[2013/7/30]

  氨基酸鹽析常用的中式鹽,主要有-硫-酸-銨、-硫-酸-鎂、-硫-酸-鈉、食鹽、磷酸鈉等。因為這個在鹽析前血清要加等量機體機能鹽水稀釋,使氨基酸含量在2.5-3.0百分之百。這個之外也可用葡糖凝膠G-25或G-50過柱的方法除鹽,所用的時間就比較短。氨基酸液體濃度:氨基酸液體濃度高時,欲離合的氨基酸每常摻雜著其它氨基酸地一塊兒沉淀出來(共沉現象)。鹽析時若溶液pH在氨基酸等電點則效果更好。普通溫度低氨基酸溶介度減低。

  影響鹽析的因素有:溫度:除對溫度敏銳的氨基酸在低溫5度操作外這時需要使用生化培養箱,普通可在室溫中施行。pH值:大部分數氨基酸在等電點時在濃鹽溶液中的溶介度最低。

  氨基酸在用鹽析沉淀離合后,需將氨基酸中的鹽去掉除掉,常用的方法是透析,即把氨基酸溶液裝入秀析袋內常用的是玻璃紙,施行透析,并不斷的改變,因透析所需時間較長,所以最好在低溫中施行。因為各種氨基酸分子顆粒體積、親水程度不一樣,故鹽析所需的鹽液體濃度也不同,因為這個調節混合氨基酸溶液中的中式鹽液體濃度可使各種氨基酸分段沉淀。但有的氨基酸如鮮紅蛋白、肌紅蛋白、清蛋白在較高的溫度20度比0度時溶解度低,培養箱更容易鹽析。

  中式鹽對氨基酸的溶解度有顯著影響,普通在低鹽液體濃度下隨著鹽液體濃度升高,氨基酸的溶解度增加,此稱鹽溶;當鹽液體濃度接著升高時,氨基酸的溶解度不一樣程度減退并先后析出,這種現象稱鹽析,將數量多的鹽加到氨基酸溶液中,高液體濃度的鹽離子如-硫-酸-銨的SO4和NH4有很強的水合力,可奪氨基酸分子的水合層使之失水,于是氨基酸膠粒凝固并沉淀析出。那里面應用最多的-硫-酸-銨,它的長處是溫度系數小而溶解度大20度時達到最高限度溶液為4.1M,即767克/升;0度時達到最高限度溶解度為3.9M,即676克/升),在這一溶解度范圍內,很多氨基酸和酶都可以鹽析出來;額外-硫-酸---銨分段鹽析效果也比其它鹽好,不易引動氨基酸改變性別。-硫-酸-銨溶液的pH常在4.5-5.5之間,當用其它pH值施行鹽析時,需用-硫-酸-或氨水調節。

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