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植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)

[2013/7/11]

  (1)農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法 將外植體放入含有外源基因的農(nóng)桿菌(Agrobacteriumtume/ociens)菌液中浸泡,然后轉(zhuǎn)入共培養(yǎng)基,再轉(zhuǎn)入篩選培養(yǎng)基誘導(dǎo)抗性愈傷組織和抗性芽,生根后的抗性植株移栽至營(yíng)養(yǎng)缽生長(zhǎng)。

  (2)基因槍法 又稱微彈轟擊法。其基本原理是將外源DNA黏附在微小的金粒或鎢粒表面,然后在高壓的作用下,微粒被高速射入受體細(xì)胞或組織,微粒上的外源DNA進(jìn)入細(xì)胞后,整合到植物染色體上,得以表達(dá),從而實(shí)現(xiàn)基因的轉(zhuǎn)化。

  (3)花粉管通道法 在植物授粉時(shí)將含目的基因的DNA溶液涂于柱頭上,利用植物在開花、受精過程中形成的花粉管通道,將外源DNA導(dǎo)入受精卵細(xì)胞,并進(jìn)一步地整合到受體細(xì)胞的基因組中,隨著受精卵的發(fā)育而成為含轉(zhuǎn)基因的新個(gè)體。該方法于80年代初期由我國(guó)學(xué)者周光宇提出。我國(guó)目前推廣面積最大的轉(zhuǎn)基因抗蟲棉就是用花粉管通道法培育出來(lái)的。該法的最大優(yōu)點(diǎn)是不依賴組織培養(yǎng)人工再生植株,技術(shù)簡(jiǎn)單,不需要裝備精良的實(shí)驗(yàn)室,常規(guī)育種工作者易于掌握。

  (4)微注射法 首先制備植物原生質(zhì)體,游離出細(xì)胞,在倒置顯微鏡和顯微操作器的幫助下,將目的基因DNA通過微管注射到受體細(xì)胞中。

  (5)電穿孔法 在短時(shí)間的高壓直流電脈沖的沖擊下,可以使原生質(zhì)膜的分子疏松,形成暫時(shí)性的直徑為3~4nl-n的小孔,但對(duì)原生質(zhì)體生活力影響不大。這時(shí),存在于原生質(zhì)體周圍溶液中的外源DNA,就可以通過這種小孔進(jìn)入原生質(zhì)體,實(shí)現(xiàn)基因的直接轉(zhuǎn)移。

  (6)微束激光打孔法 原生質(zhì)體在短時(shí)間的微束激光照射下,可在質(zhì)膜表面形成面積約0.25Pm2左右的小孔,使DNA分子進(jìn)入細(xì)胞。

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