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生物實(shí)驗(yàn)中試劑的作用及實(shí)驗(yàn)方法總結(jié)

[2012/12/14]

  一、化學(xué)物質(zhì)的檢測(cè)方法

  ①淀粉——碘液 (藍(lán)色)

  ②還原性糖——斐林試劑\班氏試劑(磚紅色)

  ③CO2——Ca(OH)2溶液(澄清石灰水變渾濁)

  ④乳酸——pH試紙

  ⑤O2——余燼復(fù)然

  ⑥蛋白質(zhì)——被蛋白酶水解 、雙縮脲試劑(紫紅色)

  ⑦脂肪——蘇丹Ⅲ染液 (橘黃色)、蘇丹Ⅳ染液 (紅色)

  ⑧DNA——二苯胺(藍(lán)色)

  ⑨染色體——龍膽紫溶液,醋酸洋紅溶液

  二、實(shí)驗(yàn)條件的控制方法

  1、加水中氧氣——泵入空氣或吹氣或放入綠色植物

  2、減少水中氧氣——容器密封或油膜覆蓋或用涼開(kāi)水

  3、除去容器中CO2——NaOH溶液

  4、除去葉中原有淀粉——置于黑暗環(huán)境

  5、除去葉中葉綠素——酒精水浴加熱

  6、除去光合對(duì)呼吸干擾——給植株遮光

  7、如何得到單色光——棱鏡色散或透明薄膜濾光

  8、血液抗疑——加入檸檬酸鈉

  9、線粒體提取——細(xì)胞勻漿離心

  10、骨無(wú)機(jī)鹽的除去——鹽酸溶液

  11、滅菌方法——培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌;接種環(huán)用火焰灼燒滅菌;雙手用肥皂冼凈,擦干后用75%酒精消毒;實(shí)驗(yàn)室或接種箱用甲醛蒸汽或紫外燈滅菌;整個(gè)過(guò)程都在實(shí)驗(yàn)室無(wú)菌區(qū)或酒精燈旁進(jìn)行。

  三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果的顯示方法

  ①光合速度——O2釋放量或CO2吸收量或有機(jī)物生成量

  ◆水生植物可依氣泡的產(chǎn)生量或產(chǎn)生速率;

  ◆離體葉片若事先沉入水底可依單位時(shí)間內(nèi)上浮的葉片數(shù)目;

  ◆植物體上的葉片可依指示劑(如碘液)處理后葉片顏色深淺。

  ②呼吸速度——O2吸收量或CO2釋放量或有機(jī)物消耗量

  ③原子或分子轉(zhuǎn)移途徑——放射性同位素示蹤

  ④細(xì)胞液濃度大小——質(zhì)壁分離

  ⑤植物細(xì)胞是否死亡——質(zhì)壁分離

  ⑥甲狀腺激素—?jiǎng)游锖难趿浚l(fā)育速度等

  ⑦生長(zhǎng)激素—生長(zhǎng)速度(體重、體長(zhǎng)變化)

  ⑧胰島素作用—?jiǎng)游锘顒?dòng)狀態(tài)

  ⑨菌量—菌落數(shù),亞甲基藍(lán)褪色程度

  四、實(shí)驗(yàn)中控制溫度的方法

  1、還原糖,DNA鑒定——沸水浴加熱

  2、酶促反應(yīng)——水浴保溫

  3、用酒精溶解葉中的葉綠素——酒精要隔水加熱、

  4、細(xì)胞和組織培養(yǎng)以及微生物培養(yǎng)——恒溫箱培養(yǎng)

  五、實(shí)驗(yàn)中常用器材和藥品的使用

  1、NaOH:用于吸收CO2或改變?nèi)芤旱膒H

  2、Ca(OH)2:鑒定CO2

  3、CaCl2提高細(xì)菌細(xì)胞壁的通透性

  4、HCl:解離或改變?nèi)芤旱膒H

  5、NaHCO3:提供CO2

  6、NaCl:配制生理鹽水或用于提取DNA

  7、瓊脂:激素或其他物質(zhì)的載體或培養(yǎng)基的凝固劑

  8、亞甲基藍(lán):用于檢測(cè)污水的細(xì)菌含量

  9、酒精:用于消毒、提純DNA、葉片脫色及配制解離液

  10、蔗糖:測(cè)定植物細(xì)胞液濃度或觀察質(zhì)壁分離和復(fù)原、作為碳源和能源物質(zhì)

  11、濾紙:過(guò)濾或紙層析

  12、紗布、尼龍布:過(guò)濾,遮光

  13、龍膽紫溶液或醋酸洋紅:堿性染料,用于染色體染色

  14、檸檬酸鈉——血液抗凝劑

  六、一些常見(jiàn)的實(shí)驗(yàn)方法

  ⑴、根據(jù)顏色來(lái)確定某種物質(zhì)的存在:

  淀粉 I2(藍(lán)色);還原性糖 斐林試劑(磚紅色);脂肪 蘇丹Ⅲ(橘黃)或 蘇丹Ⅳ(紅色);蛋白質(zhì) 雙縮脲試劑(紫色);

  大腸桿菌 伊紅和美藍(lán)(菌落為深紫色,有金屬光澤)

  ⑵、用顏色標(biāo)記法來(lái)確定原腸胚三個(gè)胚層的分化情況。

  ⑶、用熒光標(biāo)記法來(lái)證明細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性

  ⑷、同位素示蹤法:光合作用產(chǎn)生氧氣的來(lái)源; 光合作用中二氧化碳的去向; 噬菌體侵染細(xì)菌實(shí)驗(yàn)證明DNA是遺傳物質(zhì),蛋白質(zhì)不是遺傳物質(zhì); DNA的復(fù)制是半保留復(fù)制。

  ⑸、確定某種元素為植物生長(zhǎng)必需的元素的方法: 水培法(完全培養(yǎng)液與缺素完全培養(yǎng)液對(duì)照)

  ⑹、獲得無(wú)籽果實(shí)的方法: 用適宜濃度的生長(zhǎng)素處理花蕾期已去雄的子房,如無(wú)籽蕃茄、 誘導(dǎo)染色體變異,如無(wú)籽西瓜。

  ⑺、確定某種激素功能的方法: 飼喂法,切除注射法,閹割移植法,切除口服法。

  ⑻、確定傳入、傳出神經(jīng)的功能: 刺激 觀察效應(yīng)器的反應(yīng)或測(cè)定神經(jīng)上的電位變化。

  ⑼、植物雜交的方法 雌雄同花:花蕾期去雄 套袋 開(kāi)花期人工授粉 套袋 雌雄異花:花蕾期雌花套袋 開(kāi)花期人工授粉 套袋

  ⑽、確定某一顯性個(gè)體基因型的方法: 測(cè)交; 該顯性個(gè)體自交。

  ⑾、確定某一性狀為顯性性狀或隱性性狀的方法: 具有一對(duì)相對(duì)性狀的純合體的雜交 自交,觀察后代是否有性狀分離。

  ⑿、確定某一個(gè)體是否具有抗性基因的方法: 確定小麥?zhǔn)欠窬哂锌逛P病基因,用銹病菌去侵染,一段時(shí)間后,觀察有無(wú)銹斑出現(xiàn)。

  ⒀、鑒定血型的方法: 用標(biāo)準(zhǔn)血清與待測(cè)血型混合,在顯微鏡下觀察血液的凝集情況。

  ⒁、育種的方法: 雜交育種;人工誘變育種;單倍體育種;基因工程育種;細(xì)胞工程育種;多倍體育種等。

  ⒂、測(cè)定種群密度的方法:樣方法; 標(biāo)志重捕法

  ⒃、生態(tài)瓶的制作方法;瓶必須透明,且封閉

  ⒄、分離微生物的方法: 平板劃線法;用選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)(如:圓褐固氮菌的分離,金黃色葡萄球菌的分離,細(xì)菌和酵母菌的分離)

  ⒅、測(cè)定微生物群體生長(zhǎng)的方法:

  測(cè)定細(xì)菌的數(shù)目---顯微計(jì)數(shù)

  測(cè)定細(xì)菌的重量---取一定體積的培養(yǎng)基,經(jīng)離心分離,反復(fù)洗滌后,稱(chēng)濕重,或烘干后稱(chēng)干重。

  七、實(shí)驗(yàn)研究方法

  1、顯微觀察法 如觀察植物細(xì)胞有絲分裂的實(shí)驗(yàn),觀察植物細(xì)胞質(zhì)壁分離和復(fù)原的實(shí)驗(yàn)。

  2、觀察法 觀察微生物的外在性狀和表現(xiàn)等,如觀察注射了甲狀腺激素的小狗的活動(dòng)狀況,觀察動(dòng)物的毛色和植物花色的遺傳實(shí)驗(yàn)等。

  3、同位素示蹤法 如噬菌體侵染細(xì)菌的實(shí)驗(yàn),用18O和14C追蹤光合作用中氧原子和碳原子轉(zhuǎn)移途徑的實(shí)驗(yàn)等。

  4、加法創(chuàng)意 如用飼喂法研究甲狀腺激素的實(shí)驗(yàn)、用注射法研究生長(zhǎng)激素的實(shí)驗(yàn),用移植法研究性激素的實(shí)驗(yàn)等。

  5、減法創(chuàng)意 如用閹割法、摘除法研究性激素、甲狀腺激素、生長(zhǎng)激素的實(shí)驗(yàn),雌蕊授粉后除去發(fā)育著的種子實(shí)驗(yàn)等。

  6、雜交實(shí)驗(yàn)法 如孟德?tīng)柊l(fā)現(xiàn)遺傳定律的植物雜交、測(cè)交的實(shí)驗(yàn),小麥的雜交實(shí)驗(yàn)等。

  7、化學(xué)分析法 如番茄和水稻對(duì)Ca 和Si選擇吸收的實(shí)驗(yàn),葉綠體中色素的提取和分離實(shí)驗(yàn)等。

  8、理論分析法 如大小草履蟲(chóng)競(jìng)爭(zhēng)的實(shí)驗(yàn),植物根向地生長(zhǎng)、莖背地生長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn),植物向光性的實(shí)驗(yàn)等。

  9、模擬實(shí)驗(yàn)法 如滲透作用的實(shí)驗(yàn)裝置,分離定律的模擬實(shí)驗(yàn)等。

  八、實(shí)驗(yàn)技術(shù)

  1、光學(xué)顯微鏡的使用

  適用于觀察生物的微觀結(jié)構(gòu),如細(xì)胞的結(jié)構(gòu),包括光鏡下可看到的各種細(xì)胞器。

  2、臨時(shí)裝片、切片和涂片的制作技術(shù)

  適用于顯微觀察,凡需在顯微鏡下觀察的生物材料,必須先制成臨時(shí)裝片、切片或涂片。如“觀察植物細(xì)胞的質(zhì)壁分離和復(fù)原的實(shí)驗(yàn)”中要制作洋蔥表皮的臨時(shí)裝片,在生物組織中脂肪的鑒定中要制作花生種子的切片等。

  3、研磨和過(guò)濾技術(shù)

  適用于從生物組織中提取物質(zhì),如酶、色素等。研磨時(shí)要先將生物材料切碎,然后加入研磨劑〈常用SiO2〉、提取液及其他必要物質(zhì),充分研磨后,往往要進(jìn)行過(guò)濾,以除去濾渣,所用過(guò)濾器具則根據(jù)需要或或根據(jù)試題中提供的器材加以選用,如可用濾紙、紗布、脫脂棉、尼龍布等。

  4、解離技術(shù)

  用于破壞細(xì)胞壁,分散植物細(xì)胞,制作臨時(shí)裝片。

  5、恒溫技術(shù)

  適用于有酶參加的生化反應(yīng),一般用水浴或恒溫箱。根據(jù)題目要求選用。

  6、紙層析技術(shù)

  適用于溶液中物質(zhì)分離。重要步驟包括制備濾紙條、畫(huà)濾液細(xì)線、層析分離。

  7、根尖培養(yǎng)技術(shù) 觀察植物根尖有絲分裂的實(shí)驗(yàn)

  8、溶液培養(yǎng)法 探究植物必需的礦質(zhì)元素的實(shí)驗(yàn),〈拓展——微生物生長(zhǎng)因子的判斷的實(shí)驗(yàn)〉;植物的無(wú)土栽培〈注意溶液濃度和溶解氧〉。

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