范圍

　　本方法規定了化妝品中4-氨基聯苯及其鹽的液相色譜/串聯質譜測定方法。

　　本方法適用于化妝品中4-氨基聯苯及其鹽的測定，其檢測限為1.0µg/kg，定量限為3.3µg/kg。

　　方法提要

　　樣品中禁用芳香胺4-氨基聯苯及其鹽，通過超聲提取，液液萃取及固相萃取小柱凈化并濃縮后，用適當的有機溶劑定容，經液相色譜/串聯質譜測定，以內標法定量。

　　試劑與材料

　　甲醇：色譜純。

　　乙腈：色譜純。

　　甲酸：色譜純。

　　正己烷：分析純。

　　乙醚：分析純。

　　氯化鈉飽和溶液。

　　HLB固相萃取小柱或相當者：500mg/6mL。

　　30%甲醇水溶液：甲醇(3.1) 水=30 70。

　　氨水：NH3含量25%～28%。

　　5%氨水甲醇溶液：氨水(3.9) 甲醇=5 95，現配現用。

　　4-氨基聯苯：CAS92-67-1，純度>99%。

　　4-氨基聯苯-D9：CAS344298-96-0，純度>99%。

　　4-氨基聯苯標準貯備液(1000µg/mL)：準確稱取標準物質10.0mg，用甲醇溶解,稀釋，定容至10mL，于-18℃下保存。

　　4-氨基聯苯標準工作溶液：分別取(3.13)標準貯備液，用甲醇稀釋定容，制成濃度為1000ng/mL的標準溶液，于-18℃下保存。臨用時用50%甲醇水溶液稀釋成500ng/mL、250ng/mL、125ng/mL、50ng/mL、25ng/mL、5ng/mL。

　　4-氨基聯苯-D9內標標準溶液：用50%甲醇稀釋內標標準品溶液，得到100ng/mL4-氨基聯苯-D9內標溶液。

　　分別從4-氨基聯苯標準工作溶液(3.14)中分別吸取0.5mL溶液與0.5mL100ng/mL內標溶液(3.15)混合，制得內標4-氨基聯苯-D9濃度為50ng/mL，4-氨基聯苯分別為250ng/mL、125ng/mL、62.5ng/mL、25ng/mL、12.5ng/mL、2.5ng/mL的標準溶液。并根據需要配制成相應濃度的空白基質加標標準溶液。

　　儀器

　　液相色譜-串聯質譜檢測器(配ESI離子源)。

　　分析天平：感量0.1mg。

　　渦旋混合器。

　　離心機：轉速10000r/min,容量為10mL。

　　樣品過濾器：0.2μmPTFE濾膜或相當者。

　　分析步驟

　　5.1化妝水、面霜、粉底類化妝品

　　稱取樣品0.2g(精確到0.001g)，置于10mL具塞塑料離心管中，加入1mL濃度為100ng/mL氘同位素標記的4-氨基聯苯(3.15),再加入3mL氯化鈉飽和溶液(3.6)，于渦旋混合器上使樣品分散，加入3mL乙腈(3.2)，充分渦旋，并超聲提取30min，10000r/min離心10min，吸出上層清液于另一10mL具塞塑料離心管中，下層氯化鈉飽和溶液用3mL乙腈(3.2)重復提取步驟一次，合并兩次乙腈提取液，往提取液中加入正己烷(3.4)2mL，渦旋離心，靜置分層，棄去上層正己烷溶液，再在乙腈層加入正己烷(3.4)2mL，渦旋離心，靜置分層，棄去上層正己烷溶液，轉移下層乙腈溶液至另一10mL玻璃刻度試管中，40℃水浴下用氮氣吹至近干，并用30%甲醇水溶液(3.8)重新溶解、定容至2mL，并經0.2μm濾膜過濾后作為測定液上機測定。

　　5.2洗面奶、沐浴液類化妝品

　　稱取樣品0.2g(精確到0.001g)，置于10mL具塞塑料離心管中，加入1mL濃度為100ng/mL氘同位素標記的4-氨基聯苯(3.15),再加入3mL氯化鈉飽和溶液(3.6)，于渦旋混合器上使樣品分散，加入3mL乙醚(3.5)，充分渦旋，并超聲提取30min，10000r/min離心10min，吸出上層清液于另一10mL具塞塑料離心管中，下層氯化鈉飽和溶液用3mL乙醚(3.5)重復提取步驟一次，合并兩次乙醚提取液，用氮氣吹至近干，并用30%甲醇水溶液(3.8)2mL重新溶解，再加入8mL純水稀釋。

　　HLB固相萃取小柱(3.7)，接上固相萃取裝置，小柱預先用10mL甲醇、10mL水進行活化、平衡。將待凈化的樣品溶液傾倒入固相萃取小柱，待樣品溶液自然流盡后，依次用10mL純水、5mL10%甲醇溶液淋洗小柱;待淋洗液自然流盡后，用吸球吹出小柱中的殘留液，用10mL5%氨水甲醇溶液(3.10)洗脫固相萃取小柱，收集洗脫液，40℃水浴下經氮氣吹至近干，用30%甲醇水溶液(3.8)重新溶解、定容至2mL，并經0.2μm濾膜過濾后作為測定液上機測定。

　　5.3指甲油與口紅類化妝品

　　稱取樣品0.2g(精確到0.001g)，置于10mL具塞塑料離心管中，加入1mL濃度為100ng/mL氘同位素標記的4-氨基聯苯(3.15),再加入3mL乙腈(3.2)，于渦旋混合器上使樣品分散溶解，充分渦旋，并超聲提取30min，10000r/min離心10min，取上層清液于另一10mL具塞塑料離心管中，下層樣品殘渣再用3mL乙腈(3.2)重復提取步驟一次，合并兩次乙腈提取液，往提取液中加入正己烷(3.4)2mL，渦旋離心，靜置分層，棄去上層正己烷溶液，再在乙腈層加入正己烷2mL，渦旋離心，靜置分層，棄去上層正己烷溶液，轉移下層乙腈溶液至另一10mL玻璃刻度試管中，40℃水浴下用氮氣吹至近干，并用30%甲醇水溶液重新溶解、定容至2mL，并經0.2μm濾膜過濾后作為測定液上機測定。

　　測定

　　液相色譜參考條件

　　以下為液相色譜參考條件：

　　色譜柱：C18，1.7：相，100mm2.1mm(內徑)，或相當者

　　柱溫：40℃;

　　流動相：0.3%甲酸水溶液 乙腈=75 25

　　洗脫程序：等度;

　　流速：0.5mL/min;

　　進樣量：2μL;

　　質譜參考條件

　　以下為質譜參考條件：

　　電離源模式：電噴霧離子化;

　　電離源極性：正離子模式;

　　霧化氣：氮氣;

　　霧化氣壓力：45psi;

　　毛細管電壓：3500V;

　　干燥氣溫度：325℃;

　　干燥氣流速：5L/min;

　　鞘氣溫度：400℃;

　　鞘氣流速：12L/min;

　　監測方法：多反應監測(MRM)

　　分辨率：Q1(unit)Q3(unit);

　　質譜測定參數見表1;質譜鑒定的允差見表2。

　　表1　4-氨基聯苯及其內標物的保留時間、監測離子對、源內裂解電壓、碰撞氣能量

　　分析物保留時間

　　/min母離子子離子源內裂解電壓(V)碰撞氣能量(V)

　　4-氨基聯苯-D91.069179*15915033

　　4-氨基聯苯1.139170.1*1527530

　　937530

　　注1：*定量離子

　　表2　定性確定時相對離子豐度的最大允許偏差

　　相對離子豐度/%>50>20～50>10～20≤10

　　允許的相對偏差/%±20±25±30±50

　　標準曲線的繪制

　　以空白基質加標峰面積與內標峰面積比值為縱坐標，空白基質加標濃度與內標物濃度的比值為橫坐標，制作標準曲線。

　　計算

　　試樣中4-氨基聯苯的含量，按式(1)計算

　　w=………….………………………….(1)

　　式中:

　　w——試樣中4-氨基聯苯及其鹽的含量，以4-氨基聯苯計，單位為微克每千克(µg/kg);

　　ρ——4-氨基聯苯氘代同位素內標的質量濃度，單位為納克每毫升(ng/mL);

　　R——從標準曲線上查出測試溶液中4-氨基聯苯與同位素內標的質量濃度比值;

　　V——樣品定容體積，單位為毫升(mL);

　　m——樣品的質量，單位為克(g)。

　　8精密度

　　在重復性條件下獲得的兩次獨立測試結果的絕對差值不大于這兩次測定值的算術平均值的10%。

　　9色譜圖與質譜圖

　　圖1：純標樣(4-氨基聯苯、4-氨基聯苯-D9)多反應監測(MRM)分析提取離子流圖

　　1.4-氨基聯苯-D9(1.069min);2.4-氨基聯苯(1.139min)

　　圖2：4-氨基聯苯及其內標4-氨基聯苯-D9的子離子掃描質譜圖