國(guó)標(biāo)法測(cè)定飼料中的粗蛋白采用凱氏定氮法,由于操作的過程比較復(fù)雜,如果操作不當(dāng),往往會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。以下談?wù)勗诖值鞍讬z測(cè)過程中應(yīng)注意的事項(xiàng)。本文介紹的是用試劑法測(cè)定飼料中粗蛋白的含量，而我們可以用更為簡(jiǎn)單方便的方法，那就是直接用粗蛋白測(cè)定儀或者也被稱為蛋白質(zhì)測(cè)定儀，來測(cè)定飼料中蛋白質(zhì)的含量。

　　1　粗蛋白檢測(cè)之采樣過程

　　樣品采集是否規(guī)范,是粗蛋白測(cè)定準(zhǔn)確與否的基礎(chǔ)。雖然采樣方法隨不同的物品而有所不同,一般來說可根據(jù)物品均勻性質(zhì)分為下列兩類。

　　1.1　均勻性質(zhì)物品　對(duì)于均勻性質(zhì)的物品,每一小部分的成分與全部的成分相同,可以采取其任何一部分作為分析樣本。在通常情況下,粉未或研碎的物品可用“四分法”來采樣。

　　1.2　不均勻性質(zhì)物品　不均勻的物品,須采取多量樣本,然后在取出的樣本中重復(fù)取樣多次,得出一連串逐漸減少的樣本,叫做初級(jí)、次級(jí)、三級(jí)⋯⋯樣本。分析用的樣本可以在最末一級(jí)樣本中制備,使樣本能代表全部物品。所采用的取樣方法稱為“幾何法”。

　　2　粗蛋白檢測(cè)之粉碎要求

　　根據(jù)飼料工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)定,樣品要求粉碎后全部通過40目(0.45 mm)分樣篩,然后混合均勻放入密封容器。一般飼料樣品顆粒較大,成分復(fù)雜,檢測(cè)時(shí)稱量樣品少,如果細(xì)度不夠,必然造成稱樣時(shí)樣品不均勻,這是造成結(jié)果誤差的重要原因。

　　3　粗蛋白檢測(cè)稱樣要求

　　用分析天平稱取試樣0.5～1 g (精確到0.000 1) ,一式兩份,要求在稱樣時(shí)數(shù)量要合適,不能太少也不能太多。一般飼料的稱樣量為0.5 g,若粗蛋白含量為3%～5%的,稱樣量就應(yīng)高于0.5 g,否則誤差就大。

　　4　粗蛋白檢測(cè)之消化過程

　　4.1　消化溫度與速度　消化時(shí)速度要緩慢,開始要用小火,待樣品焦化后,逐步緩慢加強(qiáng)火力。如果升溫過快,則部分含氮物質(zhì)來不及轉(zhuǎn)化成硫酸銨而以氣體形式損失掉,會(huì)造成檢測(cè)結(jié)果偏低。注意經(jīng)常將濺到瓶壁上的黑渣搖入瓶底硫酸溶液中,以避免消化不完全。消化時(shí)要控制好溫度,以380 ℃時(shí)最宜。過低則消化時(shí)間長(zhǎng),消化不完全,所以消化時(shí)最好采用可調(diào)式電爐。

　　4.2　注意問題　消化時(shí)還應(yīng)在凱氏瓶?jī)?nèi)加幾粒玻璃珠,用以防止硫酸漲沸流失,并在凱氏燒瓶口蓋一個(gè)小漏斗,使蒸汽凝結(jié)回流,這樣會(huì)使測(cè)定結(jié)果更準(zhǔn)確。當(dāng)消化液達(dá)到透明狀態(tài)時(shí),并非表示樣品已消化完全,為防止結(jié)果偏低,至少還須加熱消化2小時(shí)左右。

　　5　粗蛋白檢測(cè)之蒸餾過程

　　蒸餾過程中必須確保系統(tǒng)封閉良好。樣液加入蒸餾裝置后,應(yīng)先塞好入口玻璃塞,并在入口處用蒸餾水密封,然后再加入堿液,加入時(shí)要緩慢,不可太快,加完堿液后不可再次打開入口玻璃塞。這個(gè)順序不能弄錯(cuò),否則會(huì)造成氨損失,使測(cè)定結(jié)果偏低。

　　6　粗蛋白檢測(cè)之滴定過程

　　滴定用的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度必須準(zhǔn)確。標(biāo)準(zhǔn)溶液在使用前應(yīng)將溶劑瓶上下?lián)u動(dòng)幾次,以便使凝結(jié)到瓶壁上的水珠完全溶入溶液之中,保證溶液濃度均勻一致。滴定時(shí)注意排除滴定管底部的氣泡,確保滴定結(jié)果準(zhǔn)確。

　　7　粗蛋白檢測(cè)之做好空白檢測(cè)工作

　　空白測(cè)定是衡量整個(gè)操作過程中一個(gè)非常重要的綜合性指標(biāo),良好的空白值是保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確的前提,空白值不能超過標(biāo)準(zhǔn)范圍。檢測(cè)時(shí)如果發(fā)現(xiàn)空白值過高,應(yīng)認(rèn)真查找原因并及時(shí)解決。空白值超標(biāo)一般是由于所用試劑級(jí)別不夠、試驗(yàn)用水不純或玻璃器皿不干凈等原因造成的。

　　8　粗蛋白檢測(cè)之自我校驗(yàn)

　　應(yīng)定期校驗(yàn)凱氏定氮儀氣密性。驗(yàn)證方法:為用分析純硫酸銨代替試樣,按試樣檢測(cè)步驟操作,測(cè)其含氮量應(yīng)為21.19% ±012% ,如結(jié)果不符則應(yīng)檢查稱樣、消化、加堿、蒸餾和滴定各步驟是否正確。