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購買國外細胞株應該注意的事項
[2010/11/24]
由于現在國內的細胞庫資料不是很充足,而且比較零散,包括建株時的技術層面不一,沒有比較嚴格統一的操作規范,所以在遇到比較重要的實驗項目時,一般都比較傾向于購買國外的細胞株,但購買國外細胞株需要考慮的因素有如下幾點:
1、細胞株的生物等級,由于有些細胞株及菌株屬于管制品,所以從國外購貨比較麻煩。
2、在購買國外細胞株時,需交待國外加比較多的干冰(一般在13公斤以上,采用比較密封的泡沫盒加套紙箱。
3、報關時盡量提供比較充足的證明材料,以免擔擱時間而導致干冰揮發完細胞株死亡,甚至于被退回給發貨人。
4、如果通過國外細胞株在國內的代理商購買的話,合同中需注明以下一些內容:
a.明確的到貨時間,這個時間需注明的是工作日,還是普通日。
b.采用什么樣的運輸方法?
c.如果屬于技術外的因素而細胞株無法培養活,供方需負什么樣的責任?
d.細胞株的詳細資料,以及細胞株的代數,其中,ATCC的細胞株一般都在幾十代,這個需要與國外確認,IST-Banca可與他們的代理商聯系索取詳細資料!
e.需在合同中注明原裝進口,避免相關公司魚龍渾雜,從國外購買回一株細胞株,經過培養傳代后,同時供應給幾個人;一般國外進口的細胞株都會有原裝的凍存管,而且每一支凍存管上都會有批號,而且每次的批號都不一樣。
f.在決定購買細胞株之前,必須仔細閱讀他們的培養信息,所謂“細胞株未到,培養基先行一步”。
g.在接到細胞株后,最好要求供應公司的人員現場參與,從而用于確認責任。
h.在培養前,請確認您的二氧化碳培養箱二氧化碳濃度的準確性,國外的細胞株建議用進口的細胞培養瓶,比如:orange,corning, falcon品牌的培養瓶。
i.詢問你的代理商或者經銷商,接到細胞株后是否需要離心置換出DMSO,因為有些細胞廠家建議不要離心,他們會認為離心而導致的碎片比DMSO產生毒性的害處更大,如果可以離心,轉速不要過高,一般都在1000轉以下,此處需要注意,因為有的公司會拿這一點來拒絕索賠!
j.培養基的服務,仔細與供應商確認培養基的品牌及份量,以免供應商以些理由來推翻你索賠的理由。
k.在細胞株復蘇時,一定要先想好步驟再做,一步一步來做,避免導致操作中的污染,復蘇是一個非常重要的步驟,往往容易導致污染,然后為污染所導致的雜質而傷透腦筋。
細胞運輸中,還要注意細胞株的反復凍融情況,有的供應商在供應細胞株或者培養基時,特別是需要低溫保存的培養基時,通常會出現運輸溫度與儲存溫度的差別,而導致培養基或細胞株融掉后又放進低溫冰箱進行凍存,然后再快遞給我們,特別是血清類制品,如果在接到培養基并解凍后,沉淀和絮狀物較多時,那就要懷疑是否是這種情況!
對于所買回來的細胞簽別,除了顯微鏡下的形態學觀察,還有就是特異性實驗,這也是比較重要的!細胞株有些時候復蘇后剛培養的時候,老師們發現從形態上判斷似乎不是自己所需要的細胞株,于是我就建議他做細胞屬性的特異性實驗,ATCC的技術資料最后面附有細胞株的代數,以及細胞株經過了哪些檢測,細胞株特異性實驗的方法,從而用以確認真正是自己所需要的細胞株!凍存的細胞株,特別是從國外進口的細胞株,應該立即復蘇,盡量不要再凍存,反復凍融會導致細胞株復蘇后的活性低!第一次接種培養時,應以進口的25平方厘米的培養瓶為佳,現在市面上的主要有orange,cornig,BD(Falcon),其中orange價格比較公道5-6元/個,BD(Falcon)最貴10元左右每個,BD的產品一般用于醫院生殖中心實驗室人工受精卵的一到三代培養!ATCC的細胞株培養基分為完全培養基(原代培養),次培養基(傳代培養基),請大家要注意!
如果細胞運來后,應該馬上進行復蘇,復蘇時,迅速投入37攝氏度水浴中并不斷振搖,使之迅速融化,離心應在1000轉/分以下,如果太高速會使本來脆弱的細胞產生較多的碎片,培養過程中,甚至會因為碎片而出現黑點(一般都是800r/min,5min),棄上清液,以去除二甲基亞砜。加入先前配好的培養基,并在50ml培養瓶中進行培養。